IVD发展到今天,各种新式平台不断被开发出来,以流式为例,就分化成两大类:微球流式和细胞流式。
微球流式作为新兴被提出的概念,包括所有利用微球——不管是否有磁性,去捕捉溶液中的待测分子,利用流式原理进行检测。也就是大家常提到的另一些“名词”:流式荧光、液相芯片、多重微珠流式免疫荧光、流式点阵免疫发光、流式荧光发光、免疫荧光发光等等。
关于微球流式的原理、应用,网络上的信息已是层出不穷,这里想和大家分享下在微球流式上防腐剂原料的选择。
微球流式涉及到防腐剂的应用主要有两大分类,即鞘液和清洗液。鞘液一般建议使用PC-8020和GML-2,这两款防腐剂对于细胞形态的保存更有优势。
一般做微球流式清洗液的厂家都会做浓缩,常规都是10X的浓缩,目前国内市场使用较多的还是异噻唑啉酮类防腐剂,典型的有PC-300。然而,异噻唑啉酮类的防腐剂也有一定的注意事项,根据试剂的一些特点去选择防腐剂的类别才是最正确的选择。
可以说,目前市场上使用最广泛的防腐剂就是PC-300。它的优势在于本身就是双抑菌系统,活性成分含有CMIT和MIT,兼顾快杀和长期抑菌的功能,足以应对常规抑菌需求。而且,国产牛莎PC-300相对于进口产品也确实做到了物美价廉,国产PC-300无疑也是ivd厂家更好的选择方向。
古人云“成也萧何,败也萧何”,PC-300的双抑菌系统带来更好的抑菌能力的同时,也让它受限于pH值“8.5”。PC-300的快杀功能来源于CMIT,即甲基氯异噻唑啉酮,当ph值高于8.5时,即在碱性环境下,CMIT的活性会受到影响,长时间处于碱性环境,PC-300的抑菌效果会下降,所以碱性环境更推荐使用PC-950和BIT-10,pH适用范围2-12,相较于PC-300更广。
前文提到生产厂家做清洗液产品时一般都会做浓缩,10X或者20X,在运输时可降低一定成本。此时,高盐环境下加上较高浓度的PC-300,清洗液很容易出现“发黄”的情况。
本质是因为PC-300的活性成分CMIT,甲基氯异噻唑啉酮的氯基出现游离,致使溶液出现变色,如下图所示。
从图中不难看出,使用PC-950就不会出现变色的问题,因为PC-950的活性成分是MIT,从根源杜绝了氯基游离出现变黄,所以在做浓缩清洗液的情况下,也不推荐使用PC-300,而是PC-950。
PC-300的推荐使用浓度在0.05%-0.1%,浓度过高让来风险的同时也可能会导致变色,一味提高浓度反而不如加入另一款防腐剂,与之协同作用。
综上,不难看出,微球流式的清洗液防腐剂的最优选择即PC-950+BND-10的搭配,不管是研发阶段实验室配制的工作液还是后期生产阶段的浓缩清洗液成品,这个搭配可以有效规避掉长菌、发黄等各种“小意外”,节省时间和人力成本。
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