对于刚接触科研的同学们,诡异结果图真的遍地开花!有的在培养皿里培养出乌龟、有的养出鬼脸,还有人跑 WB 能跑出山水画。相比之下,科研老司机们的实验结果图真的非常丝滑,专治各种不服!今天学霸君带大家盘点下 WB、PCR、细胞实验中的
WB 是实验室的第一道门槛,都说 WB 是玄学,充满未知,结果图千变万化,但是你见过山水画一般的 WB 结果图吗?胶不混匀,电压过大的下场就是这样~
还有部分科研小白 WB 转膜总是控制不住温度,拍照又加了过多的曝光液,结果曝光时不仅膜上脏乱差!背景都能勾勒出一棵大树!
不过,到底什么样的结果才算好的实验结果啊?最近小红书一位科研大神发出漂亮的电泳图 ——loading 出方块的电泳,除了经验和运气也需要靠仪器设备的加持~
大神分析出了个人经验 —— 制胶时在涡旋仪上振一会,颠倒一下试管,然后再振,这样更能充分混匀;下层胶放久一些,放五十分钟;电压先 80V 30 min 再 100V 60 min 转膜的时候,切记 PVDF 膜在转膜液里可以放久一些,放四分钟哦~
如果 WB 是第一道门槛,PCR 就是进阶必备实验,从蛋白表型过渡到分子机制,考验了一个科研人的稳定、耐力、敏捷度等全方面能力。qPCR 曲线经常乱成一团、RT-PCR 电泳图总是拖尾或者消失,结果图一言难尽。
照着说明书,坎坎坷坷地摸索,失败了 N 多次,也不知道失败原因在哪里,终于再一次对着说明书一字一句地理解,原来是 cDNA 浓度太高了。
PCR 结果跟一样,一样的引物、DNA、酶、PCR 的程序、体系,结果差距这么大?!做了半年,感觉白做了,数据都不敢用了。
再来看一块琼脂糖琼胶电泳结果,背景清晰不拖尾,120v 30 min 结合一点手稳与运气,即可收获完美凝胶图,及时更换 TAE 电泳液也是另一个小 tip 哦!
其实造成 qPCR 实验重复性差的原因主要是加样不准确。这种情况下,可以更换性能更好的移液枪,将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系,最后加样的时候可只用一档,也能提升结果图美观度。
看完 WB、PCR 就进入第三 PK 了!培养皿是一个好地方,拥有合适的 PH、适宜的温度,以及各种养分,这会使结果的差异化变得更大。
除了能养出细胞系、原代细胞外,刚进入实验室的新手科研人,还可能会养出来各种细菌、乌龟、鬼脸.......
BSA:DMEM(1:9) +1% 的双抗,结合合适的传代比例(刚复苏 1:2 传代,细胞状态好就换成 1:3/1:4,需要较多细胞的时候 1:5/6)。
据说用 PBS 漂洗爬片上的细胞 2 次,每次 3 min;加入 4% 多聚甲醛没过细胞,室温固定 20 min;后用 PBS 漂洗 3 次,每次 3 min;再加入 Triton X-100 没过细胞,室温通透 20 min,通透完成后,PBS 漂洗 3 次,每次 3 min;加入山羊血清封闭 1 h,封闭后不漂洗,依次孵育一抗二抗,漂亮结果就轻松拿到啦!
1、充分准备与规划:在实验开始前,彻底阅读并理解实验指南或规程,明确实验目的、步骤、所需材料及潜在风险;
制定详细的实验计划,包括所有预期的操作顺序;确保所有实验器材已校准并处于良好工作状态,试剂和溶液新鲜有效,标签清晰无误。
2、遵守安全规范与操作流程:实验过程中,不要随意离开正在进行的实验,时刻监控实验状态,及时调整或中断实验以防失控。
3、细致观察与准确记录:实验中保持高度的警觉性和观察力,注意任何异常现象,如不寻常的颜色变化、气体释放、温度波动等。
最后,你有没有 get 过意外实验结果,他们都长什么样?欢迎分享你的实验结果图到【生物学霸后台】,有机会我们再拿出来跟大家分享哦!
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