一般来说,通过细致调整上述参数,可以有效改善 WB 转模糊的问题,提高实验结果的清晰度和特异性。
谢谢师姐,但是电压和抗体浓度我都做过梯度测试;凝胶没问题;试剂每次也都现配;封闭我也调整到 1.5 小时了,还是会糊。
如果还不行,我教你一条「WB 捷径」,凝胶扔了,也别转膜,用这个实验,30 个样本,5、6 个小时就出结果。
一种不提蛋白不转膜的 WB:In-Cell Western,顾名思义,是一种在细胞内就可以完成的简单 WB。比传统 WB 简单、快速、便捷。
In-Cell Western(ICW)与传统 WB 方法不同,其使用固定和透化的细胞而不是细胞裂解物对蛋白质表达进行原位分析。并且可以使用光谱不同的荧光染料对多个目标进行定量,是一种确定大量样品中相对蛋白质水平的快速方法。
对于已经使用传统 WB 已经验证过抗体特异性且不需要考虑分子量的研究人员来说,ICW 是一种理想的实验方案选择。作为一种免疫荧光检测,ICW 结合了传统 WB 的特异性与免疫荧光、ELISA 的更高重现性及通量,可对 6~384 个孔的微孔板中生长的细胞中进行蛋白表达分析。
● 洗掉未结合的抗体后,使用具有荧光功能的成像仪对微孔板进行成像,信号强度与细胞中存在的靶蛋白量成正比。
由于消除了传统 WB 方案中的样品制备、跑胶及转膜等步骤,ICW 需要的操作及实验时间更少。
最后,ICW 是一种多功能技术,可广泛应用于包括药物治疗或基因操作的蛋白质表达变化、评估蛋白-蛋白相互作用以及分析特定细胞区室中的蛋白质定位。ICW 还可用于筛选大型化合物库,了解化合物对蛋白质表达的影响,使其成为药物发现和开发的有效工具。
简单的。Bio-Rad ChemiDoc MP 全能型成像系统目前可申请免费试用点此申请,配合优化的 ICW 方案可以简化实验并优化效果。ChemiDoc MP 系统具有五个荧光通道,可实现三重荧光的 ICW 实验,并提供卓越的图像质量,配套的 ImageLab 软件也可方便地进行 ICW 的结果分析。快来点击下方图片链接申请吧~
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