奥林巴斯创立于 1919 年,作为世界范围内在医疗、科学及映像领域位居国际领先地位的尖端精密光学技术企业。奥林巴斯用「实现世界人民的健康、安心和幸福生活」的企业使命谱写百年辉煌。在全球生命科学的舞台上,奥林巴斯显微镜以其卓越表现,为进一步探索生命的奥秘提供了可靠的支持,为生命科学和临床医学的发展做出杰出贡献。
使用荧光染料标记生物组分,然后利用光学显微镜获取荧光图像的方法,已成为观察生物组织和细胞分子定位的常用实验方法。然而,由于显微物镜中透镜组造成的光学色差,常会导致难以使用紫外光和近红外区域中的荧光染料,在同一标本中精确显示不同组分在细胞内的准确的共定位关系。使用
PLAPON60XOSC,即使荧光标记横跨紫外和近红外区域,也能以几乎没有色差的方式准确显示荧光标记分子定位情况。下面介绍在单个标本中使用四种类型荧光抗体,仍然可以准确可视化荧光标记分子的共定位分析的案例。
合成酶DGLα(白色)和受体CB1(绿色)聚集在小鼠基底杏仁核的锥体细胞胞体(星号)周围,形成具有独特内陷结构的内陷突触(箭头)。这些侵入性突触表达囊泡抑制性氨基酸转运蛋白(VIAAT)(蓝色)和囊泡谷氨酸转运蛋白-3(VGluT3)(红色),表明其分别具有抑制性和兴奋性递质GABA和谷氨酰胺酸的神经化学特性。与此相比,如果未在其周围形成DGLα簇,则抑制性突触的CB1阳性、VIAAT阳性常见类型不表达VGluT3,这表明其仅具有GABA的神经化学特性。比例尺:5 μm。
GABAergic篮状细胞有两种表达受体CB1并控制锥体细胞胞体的亚型,一种亚型表达胆囊收缩素(CCK),另一种表达血管活性肠肽(VIP)。这种四色免疫荧光染色显示,在高表达CB1(绿色)和VIAAT(蓝色)的阳性神经末梢(红色)周围缺乏DGLα(白色),这表明VIP阳性神经末梢不参与侵入性突触的形成。比例尺:5 μm。
这种超色差校准物镜可校正大范围的色差,采集的图像可以准确反应荧光信号定位。它可大幅度校正2D和3D图像中的横向和轴向色差,从而为共定位分析带来可靠性和准确度。
如图(1)和(2)所示,针对多种功能分子和细胞标志物的四色免疫荧光提供有关细胞表达和亚细胞定位的详细信息,其中包括相关功能细胞与细胞间空间距离的相互依赖或独立关系。更为重要的是,显微镜的检测灵敏度和分辨率,以及能够尽可能减小色差的物镜光学性能是实现免疫荧光目标的重要因素。
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